بررسی عملکرد mirnaی اینترونی مصنوعی (ضد) کالومنین در بالادست cdna ی فاکتور 9 انعقادی در رده ی سلولی پستاندار

thesis
abstract

نقص در فاکتور? انعقادی شایعترین عامل در بیماری هموفیلی b است. در حال حاضر بیماران هموفیلی b با روش جایگزین درمانی با پلاسمای ذخیره شده یا فاکتور ? نوترکیب مورد مداوا قرار می گیرند. گاما کربوکسیلاسیون گلوتامیک اسیدهای ناحیه ی gla فاکتور ? که توسط آنزیم گاماکربوکسیلاز انجام میگیرد به عنوان یکی از تغییرات بعد از ترجمه کلیدی برای فعالیت بیولوژیک این پروتئین ضروری است و همواره باید در هنگام تولید فاکتور9 نوترکیب مورد توجه قرار گیرد. توانایی بالقوه mirnaهای مصنوعی بیان شونده در درمان بیماری ها را باید منتسب به توانایی آنها در برش اختصاصی rnaی هدف آنها دانست. این نوع rnai (mirnai)، مزایای اصلی هر دو نوع sirna و mirna که به ترتیب هدف گیری اختصاصی و بیان دائم باشند را داراست. با در نظر گرفتن نقش باز دارندگی کالومنین بر روی گاماکربوکسیلاز، در این پژوهش ضمن طراحی دو mirna مصنوعی اینترونی بر علیه کالومنین، تاثیر آن بر بیان فاکتور 9 انسانی مورد بررسی قرار گرفته است. توالی رمز کننده ی mirna های مصنوعی ضد کالومنین در اینترون 1 کوتاه شده فاکتور 9، با اثر افزایندگی، در بالادست cdna ی فاکتور 9 انسانی قرار داده شد. پس از بررسی توالی ژن کالومنین انسان و همردیفی 6 واریانت آن دو sirna علیه توالی حفظ شده از این ژن طراحی شد و عملکرد هر یک از آنها در چارچوب یک mirna ی طبیعی، بنام mir-30a در داخل اینترون کوتاه شده 1 فاکتور 9 با بهره گیری از روش های نرم افزاری مورد پیش ‍ بینی قرار گرفت. توالی های طراحی شده طوری در نظر گرفته شدند تا در پردازش اینترون و تولید و بالغ شدگی mirna خللی وارد نگردد. پس از سنتز توالی رمز کننده دو mirna با نام های mir6 و mir5 که در اینترون 1 کوتاه شده فاکتور 9 قرار گرفته بودند، قطعه های مزبور با روش های مولکولی در ناحیه بالادست cdna فاکتور 9 در یک وکتور بیانی مجهز به پروموتر cmv قرار داده شد. پس از بررسی صحت مراحل همسانه سازی، پلاسمید های نوترکیب به صورت موقت به سلول های hek293t منتقل شدند و در ادامه میزان بیان ژن های کالومنین و فاکتور 9 انسانی در سلول های ترانسفکت شده در سطح رونویسی با روشreal-time pcr مورد بررسی قرار گرفت. نتایج اولیه بدست آمده از بررسی سلول های ترانسفکت شده با سازه های حاوی mir6 دلالت بر تولید mirnaی بالغ داشت اما کاهش بیان کالومنین مشاهده نشد که علت آن می تواند اشباع شدن exportin 5 بخاطر ازدیاد mirna های بیان شده باشد. با توجه به نتایج بدست آمده به نظر می رسد که mirnaی مصنوعی با اسکلت mir-30a بتواند از متن یک اینترون خارج شده و مراحل بلوغ را طی کند. علاوه بر این بیش بیان فاکتور ? نیز در این سلول ها در مقایسه با سلول های کنترل مشاهده شد که نشانگر پردازش کامل اینترون معرفی شده بود. به این ترتیب، علاوه بر تایید فراوری صحیح mirna مصنوعی بیان شده، کاربرد دوگانه اینترون شامل عملکرد ذاتی آن در بیان ژن مربوطه و نقش آن در حمل و تولید mirna مصنوعی مورد تایید قرار گرفت.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

بررسی عملکرد میکرو rnaی اینترونی مصنوعی (ضد) کالومنین بیان شده در 3utr فاکتور 9 انعقادی نوترکیب در رده ی سلولی پستانداران

هموفیلی b یا کریسمس از بیماریهای مسیر انعقادی است که درنتیجه اختلال یا کمبود فاکتور9 حاصل میشود. درمان این بیماری مانند بسیاری از بیماری های سیستمیک دیگر به روش جایگزین درمانی انجام می گیرد. فاکتور 9 در طی مراحل بلوغ خود متحمل برخی تغییرات پس از ترجمه می شود. از جمله این تغییرات کربوکسیله شدن 12 اسید آمینه گلوتامیک اسید است. کربوکسیلاسیون توسط آنزیم گاما کربوکسیلاز در شبکه آندوپلاسمیک انجام می ...

15 صفحه اول

کلونینگ cDNA فاکتور VII انعقادی حاصل از رده سلولی هپاتوما

Abstract Background: Factor VII, is a coagulant protease it begins the proteolytic cascade reactions and produces thrombin. The use of recombinant human factor VII, (rhFVII) is effective for the treatment of patients with hemophilia A or B. It is a target for gene therapy. This study was done to clone factor VII from HepG2 cell line. Methods: RNA was extracted from the hepatoma, (HepG2), ...

full text

کلونینگ cdna فاکتور vii انعقادی حاصل از رده سلولی هپاتوما

چکیده سابقه و هدف: فاکتور هفت، پروتئاز انعقادی مسئول شروع آبشار واکنش های پروتئولیتیک است که به تولید ترومبین و در نتیجه تشکیل لخته می انجامد. به دلیل به کارگیری موفق آن در کنترل هموفیلی و نقش احتمالی آن در فرآیندهای مختلف سلولی، فاکتور هفت به عنوان هدف ژن درمانی و سایر مشکلات بالینی مورد توجه قرار گرفته است. در این مطالعه، رده سلولی hepg2 برای کلون فاکتور vii مورد استفاده قرار گرفت. روش بررسی:...

full text

تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی‌ژنی از فاکتور 9 انعقادی در سلول‎های پستاندار

زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش‌ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور IX انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (CMV) که بیان یک مینی ژن فاکتور IX را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سا...

full text

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد....

full text

بررسی بیان RNA ی غیر کد کننده ی بلند Hottip (lncRNA) در رده ی سلولی B16F10 ملانومای موشی

زمینه و هدف: ملانوما یکی از انواع سرطان پوست است که نسبت به سایر سرطان های پوست خطرناک تر می باشد. یکی از عوامل موثر در ایجاد سرطان ها، گروهی از RNA های غیر کد کننده اند که به نام lncRNA (long noncoding RNA) شناخته می شوند. این مولکول های غیر کد کننده بیش از 200 باز طول دارند و به عنوان یک تنظیم کننده در پیشرفت سرطان عمل می کنند Hottip (HOXA transcript at the distal tip) یک lncRNA ی بین ژنی است...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023